CERTAIN IMMUNOPFYSIOLOGICAL MECHANISMS OF WOUND REPAIR IN CONDITION OF WOUND HEALING MADICAL MEANS «Cellgel» APPLICATION

To compare proliferative and apoptotic activity of epidermic and dermal cells when forming a rough cicatrace in contrast to epitalization of wound without producing cicatrace followed by regeneration of damaged region of the skin, an experiment was made on 40 nobilous rabbits. Proliferation index (Ki-67-positive cells), index of readiness for apoptosis (CD95-positive cells) were detected immunohistochemically. Understanding of the role of apoptosis in formation of cicatricose tissue can encourage the search of new approaches to the therapy, associated with the effect on immune mechanisms of regulation of cell death and efficiency assessment of therapeutical substances used for proliferation of producing cicatrices.

Keywords: healing wounds «Cellgel», reparative regeneration, apoptosis, flow cytometry.

Результаты исследования и их обсуждение

До начала лечения раны неправильно округлой формы, размер составляет 3.9-4.1 см в диаметре. Вокруг раны очаг инфильтрации до 3.5 см в диаметре. Стенки раны плотные, спаяны с окружающими тканями, дно покрыто плотным налетом фибрина, выделяется до 2-3 мл гнойного отделяемого белесоватого цвета тестоватой консистенции. Глубина язвенного дефекта до 2 см. При гистологическом исследовании определяются очаги некроза в соединительной и мышечной ткани, расширение кровеносных сосудов со стазом крови, экссудация лейкоцитов. Сосочковый слой дермы имеет четкое разграничение на слои: с выраженной клеточной инфильтрацией, представленной моноцитами, единичными макрофагами и рыхлой соединительной тканью с большим количеством фиброцитов, единичными фибробластами, единичными моноцитами, плазмоцитами.

У животных в группе (традиционное лечение) закрытие раневого дефекта происходит к 20 суткам, с формированием грубого соединительнотканного рубца гистологически сохраняются дистрофически – дегенеративные изменения подкожной клетчатки и мышц, дегенеративные изменения нервных стволиков.

В экспериментальной группе на 10 сутки эксперимента наблюдается полная эпителизация раневого дефекта с его оволосением. Гистологическая картина эпителизации раны с сохра- нением всех функционирующих структур.

Эпителизация раны без образования соединительнотканного рубца с восстановлением функции поврежденного участка (рост волосяного покрова) характеризует потенцирование веществом, выделенным из экстракта клеток куринного эмбриона, механизмов физиологической репаративной регенерации.

Пролиферативную активность клеток эпидермиса и дермы изучали с помощью моноклональных антител Ki 67 (MIB-1), которые идентифицируют ядерный антиген, присутствующий у большинства пролиферативных клеток. Антиген Ki 67, определяемый соответствующими моноклональными антителами, короткоживущий протеин, разрушающийся на протяжении 1-1,5 часа. Благодаря этому Ki 67 выявляется только в клетках, которые делятся, т.к. не успевает накапливаться и не остается в спокойных клетках [4].

Для оценки процессов программированной клеточной гибели использовали моноклональные антитела к Fas-рецепторам (CD95/Apo 1). Используется для определения числа клеток, находящихся в стадии апоптоза.

При иммуногистохимическом исследовании до начала лечения количество клеток экспрессирующих маркер CD95+ и маркер пролиферации – Ki67+ одинаково во всех экспериментальных.

В экспериментальной группе при применении ранозаживляющего средства «Cellgel» на 1-3 сутки эксперимента наблюдается рост носителей CD95+ с последующим его снижением, начиная 3-5 суток. Начиная с 1 суток, наблюдается рост носителей маркера Ki67+ и продолжается до 15 суток эксперимента. На 3-5 сутки возникает «перекрест маркеров», что, на наш взгляд, характеризует переход первой фазы раневого процесса во вторую: завершение процессов гибели клеток и начало активных пролиферативных процессов.

В группе контроля (традиционное лечение) наблюдается снижение уровня маркера готовности клеток к апоптозу. На 5 сутки эксперимента наблюдается некоторый всплеск уровня маркера пролиферации с дальнейшим его уменьшением практически до нуля.

В эпидермисе молодых рубцов обнаруживаются активные процессы пролиферации. Метка локализуется в ядрах клеток базального и шиповатого слоя. В дерме метка присутствует в округлых клетках. Они имеются в сосудах и между коллагеновыми волокнами зоны роста. Возможно, это клетки фибробластического ряда. Экспрессия белка Fas, свидетель- ствующая о том, что эпидермоциты готовы к апоптозу, была обнаружена в клетках базального и шиповатого слоя. В дерме метки нет.

Выводы: 

1. Вещество, выделенное из экстракта клеток куринного эмбриона является индуктором апоптоза в первую фазу раневого процесса.
2. Во вторую и третью фазы раневого процесса данное вещество индуцирует механизмы физиологической репаративной регенерации.

   Таким образом, применение влиянием вещества, выделенного из экстракта клеток куринного эмбриона и входящего в состав ранозаживляющего средства «Cellgel» в качестве индукторов апоптоза и пролиферации открывает совершенно новые перспективы регуляции раневого процесса.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Chang S. E. Sphingosine may have cytotoxic effects via apoptosis on the growth of keloid fibroblasts / S. E. Chang, K. J. Kim, K. H. Ro // J. Dermatol.– 2004.– Vol. 31.– P. 1-5.
2. FesusL.P. Apoptosis; Molecular mechanisms in programmed cell death / L. P. Fesus, J. A. Davis, M. Piacentini // Europ. J. Cell Biol.– 1991.– Vol. 747.– P. 195-204.
3. Суховей Ю.Г., Костоломова Е.Г., Цирятьева С. Б., Аргунова Г. А., Унгер И. Г., Гольцов С. В. Регенераторно-репаративные и антибактери- альные свойства препарата «Cellgel» в эксперименте//Российский Иммунологический Журнал, 2015, том 9 (18), No 2 (1). с 44-46.4. [Regenerative and reparative antibacterial characteristics of the drug «CELLGEL» in experiment Sukhovey J. G., Kostolomova E. G., Tsyryateva S. B., Argunova G. A., UngerI.G., GoltsovS.V. // Russian Journal of im- munology, 2015, 9 (18), No 2 (1). с 44-46.4. 2]
4. Cell proliferation in the growing human heart: MIB-1 immunostaining in preterm and term infants at autopsy/ V. Huttenbach, M. L. Ostrowski, D. Thaller, H. S. Kim // Cardiovask. Pathol.– 2001.– Vol. 10.– No3.– P. 119-123.