Изобретение относится к области фармацевтики и биологии и представляет собой способ получения жизнеспособной гетерогенной популяции клеток кожи, включающий забор биоптата кожи на глубину ...
Изобретение относится медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для определения субпопуляционного состава клеток кожи. Способ определения субпопуляционного состава клеток кожи и получения цитоиммунограммы кожи включает забор биоптата кожи на глубину 2 мм, гомогенизацию ткани в 0,9%-ном водном растворе хлорида натрия при температуре +23...+25°С, извлечение гомогената, фильтрование гомогената через инертную фильтровальную перегородку с диаметром пор 20 мкм, центрифугирование гомогената при 400 g в течение 5 минут при температуре +23...+25°С. После центрифугирования определяют жизнеспособность клеток кожи, инкубируют в течение 20 минут клетки кожи с моноклональными антителами для проточной цитометрии меченые флюорохромами, проводят фенотипирование клеток кожи, определяют количество клеток кожи определенного фенотипа – цитоиммунограмму кожи:
- кератиноциты CD49f+, из них активированные CD49f+HLA-DR+;
- фибробласты (фиброциты) CD45-CD14-CD44+, из них активированные CD45-CD14-CD44+CD80+;
- тучные клетки CD249+, из них активированные CD249+CD63+;
- моноциты (макрофаги) CD45+ CD14+, из них активированные CD45+CD14+HLA- DR+;
- внутриэпидермальные макрофаги CD207+, их них активированные CD207+CD80+, CD207+HLA-DR+, CD207+CD80+HLA-DR+;
- эндотелиальные клетки CD146+, их них активированные CD146+CD34+, CD146+HLA-DR+, CD146+CD54+, CD146+CD54+HLA-DR+;
- лимфоцитарные популяции: Т-лимфоциты CD45+ CD3+, Т-хелперы CD45+CD3+CD4+CD8-, Т- супрессоры CD45+CD3+CD4-CD8+, В-лимфоциты CD45+CD3-CD19+, NK-лимфоциты CD45+CD3- CD16+CD56+.
Использование данного способа позволяет составить количественную и функциональную характеристику всех составляющих элементов кожи для использования в диагностике.
